כדי לשפר את יעילות בדיקת קוטלי חרקים באירוסול על יתושים.

פיתוח שיטות אמינות וסטנדרטיות לבדיקת רגישות נחיל יתושים לקוטלי חרקים הוא קריטי להבנת יעילותם של רכיבים פעילים או פורמולציות חדשות. שיטות לבדיקת רגישות נחיל יתושים לקוטלי חרקים או מוצרים במגע (כגון אלו המקודמים בתוכניות בריאות הציבור) מבוססות וסטנדרטיות היטב. עם זאת, שיטות בדיקה לקוטלי חרקים נדיפים או אירוסוליים המשמשים במוצרים ביתיים קשות ליישום יעיל. בהתבסס על המלצות ארגון הבריאות העולמי לקוטלי חרקים ביתיים, פיתחנו שיטה סטנדרטית ובעלת תפוקה גבוהה לבדיקת מוצרי אירוסול באמצעות יתושים בכלובים ושיטת חיטוי יעילה שבוצעה בתא בדיקה פיט-גריידי (תא בדיקה PG). אימתנו את יעילותה של שיטה חדשה זו באמצעות אוכלוסיות של יתושי Aedes ואנופלס עמידים ורגישים לחומרי חרקים. מאפיין חדשני של שיטה זו הוא הכללת תא המכוון לכלובי היתושים, המאפשר הערכה כמותית בזמן אמת של שיעורי הריגת יתושים לאחר חשיפה לחומרי חרקים. חיטוי באמצעות מקלון מסיר ביעילות שאריות שמן אירוסול המכיל פירתרואידים מפני השטח של תא הבדיקה, עם שיעורי תמותה של פחות מ-2% עבור יתושים רגישים שנבדקו ישירות על פני התא. לא נצפתה הטרוגניות מרחבית בשיעורי הריגת או תמותה בקרב יתושים בכלובים בתא PG. שיטת הכלוב הכפול שלנו מספקת תפוקה גבוהה פי שמונה משיטת המעוף החופשי, מה שמאפשר בדיקה בו זמנית של זני יתושים שונים והבחנה יעילה בין אוכלוסיות יתושים רגישות ועמידות הנבדקות במקביל.
עד כה, קוטלי חרקים באירוסול שימשו בעיקר בבתים להגנה אישית, עם שימוש מוגבל בתוכניות בריאות הציבור. עם זאת, מחקרים אחרונים הראו שימוש נרחב בחומרי הדברה ביתיים באזורים בהם מחלות המועברות על ידי וקטורים נפוצות. בין אם המוטיבציה היא דוחה יתושים או מניעת מחלות, קיים צורך דחוף בשיטות סטנדרטיות וקלות לשימוש לסינון אוכלוסיות יתושים אנדמיות לרגישות לקוטלי חרקים ביתיים. זה חיוני לחיזוי יעילות קוטלי חרקים כנגד וקטורים מקומיים ולהבנת האופן שבו שימוש בחומרי הדברה ביתיים משפיע על הברירה האבולוציונית לעמידות לחומרי חרקים.
שיטה משלימה 1 מספקת הוראות מפורטות שלב אחר שלב לביצוע תוכנית בדיקות קוטלי חרקים באירוסולים שלנו.
למרות שהנחיות ארגון הבריאות העולמי ממליצות על שימוש במכשירי אינבוליזציה אוטומטיים, הן אינן מספקות מפרטים טכניים ספציפיים. השימוש במכשירי אינבוליזציה אוטומטיים הוא קריטי, שכן אינבוליזציה ידנית בתא פרופילן גליקול אינה רק עתירת עבודה אלא גם עלולה לגרום לחוסר עקביות מרחבי ולשינויים במשך האינוסציה.
יש לעקר את תא התגובה לאחר כל בדיקה, אך שיטת הניקוי הפנימית המומלצת בהנחיית ארגון הבריאות העולמי כרוכה בהזרקת מים מצינור. בעבודתנו היומיומית, שיטה זו היא השלב הדורש עבודה רבה ביותר בהפעלת ציוד ביו-אנליטי, לכן פיתחנו ובדקנו הליך עיקור מבוסס מקלון.
החלקים הנשלפים של המאוורר מטופלים כמתואר לעיל, והלהבים ומסגרת המאוורר מנוקים בעזרת ספוג ספוג בתמיסה של 5% של דקון 90.
בהתבסס על הקשר בין משך הריסוס לקצב אספקת המוצר, מתקן האירוסול שלנו הפגין גם דיוק טוב בבקרת יחס מינון האירוסול, לפחות בטווח שנבדק של פי 1 עד 4. כפי שמוצג באיור 3b, מאפיין זה חשוב במיוחד לאפיון יחסי מינון-תגובה של פורמולציות אירוסול חדשות או לקביעת מינון הזיהוי לאיתור עמידות לקוטלי חרקים.
אנו מדגימים כי הפרוטוקול המתוקן שלנו להערכת קוטלי חרקים ביתיים באירוסולים, באמצעות חיטוי עם מקלוני מטוש, כלובים כפולים, מרססים הנשלטים מרחוק והקלטה ביומטרית ממצלמות אקסטרים, הוא אלטרנטיבה יעילה וברת ביצועים יותר לפרוטוקול הנוכחי.^WHOהמלצות. שיטת חיטוי המקלונים, הדורשת 20 דקות בלבד, חוסכת זמן משמעותית בהשוואה לפרוטוקול הקיים (שדורש בדרך כלל שעה לכל תא בדיקה). היא גם מפחיתה את הזמן שהמפעילים מבלים על לבישת ציוד מגן אישי מלא (למשל, קסדות נשימה ובגדי עבודה אנטי-סטטיים). יתר על כן, שיטה זו מייצרת פחות נוזלים ובגדים מזוהמים לטיפול מאשר ניקוי מלא של תא הבדיקה, ובכך ממזערת את הפוטנציאל לזיהום החדר בו נמצא תא הבדיקה. שיטת חיטוי המקלונים מתאימה גם לחיטוי חדרי בדיקה חצי-קבועים הדורשים^{מִינִימָלִי}מיקום רהיטים במגוון סגנונות חדרים.
נושא מרכזי שנבחן במחקר זה ובאחרים הוא סטנדרטיזציה של מינוני חשיפה לקוטלי חרקים המיושמים בסביבה על פני פרוטוקולי בדיקה שונים. כפי שמוצג באיור 2ב', למרות משך ריסוס קבוע, נפח הריסוס השתנה בין סוגי מיכלי האירוסול, דבר שעשוי לשקף הבדלים בתהליכי ייצור (למשל, לחץ פנימי, שימוש בדלק, מבנה הזרבובית וכו'). יתר על כן, המחסור הנוכחי במכשירי ריסוס מרחוק זמינים מסחרית עם הגמישות הנדרשת במשך הריסוס מגביל את השימוש בהם בהערכת קשר מינון-תגובה להדברת יתושים. ריסוס ידני דרך פתחי בדיקה או פתחי גישה (אם זמינים) יכול להוביל לשינויים במינוני החשיפה. למעשה, תוצאותינו מדגישות את הצורך והחשיבות של צמצום מקורות השונות הללו. עבור אוכלוסיות Aedes aegypti עמידות, צפינו בקורלציה בין מינון האירוסול לקביעה הסופית של רגישות או עמידות (איור 3ב'). באופן אידיאלי, יש לתקנן את מינוני האירוסול בגרמים של חומר באירוסול ולא במשך האירוסוליזציה כדי להקל על השוואות בין מחקרים שונים.
RCAD מציעה גישה חלופית למחקר עתידי אשר ממזערת את ההשפעה של שינויים בתהליך. למרות שמצאנו כי סטנדרטיזציה של תרסיסי אירוסול אינה אפשרית, הדגמנו כי ניתן להעריך באופן שחזור את מסת האירוסול המועברת דרך מיכלי אירוסול שונים על ידי כיול אורך הריסוס (איורים 2b, 3a). סטנדרטיזציה כזו של ריכוז האירוסול בכל תא בדיקה היא קריטית לשיפור שחזור התוצאות.
בהתבסס על ניסיוננו ושל קבוצות מחקר אחרות, ההמלצות הכלולות בהנחיה הנוכחית בנוגע לשימוש בשיטות גילוי אירוסולים לבדיקת יתושים חופשיים מציבות אתגרים לוגיסטיים משמעותיים למחקרי מעבדה ומחקרי שדה למחצה. לדוגמה, לשיטות גילוי יתושים חופשיים יש תפוקה נמוכה מאוד (כולל לכידה מחדש עתירת עבודה של יתושים חופשיים ששרדו) וסובלות ממספר מגבלות טכניות, כגון קשיים בקביעת שיעורי ההרג בזמן אמת.
למרות שניסוי הכלוב הכפול המאומת שלנו מטפל בנושא מגבלות הזרימה ומהווה שיטה בת קיימן לסינון רגישות יתושים לקוטלי חרקים באירוסולים, יש לציין ששיעורי התמותה של יתושי איי קיימן היו נמוכים משמעותית בניסוי הכלוב מאשר בניסוי המעוף החופשי (איור 5 ג', טבלה 1). הבדל זה עשוי לשקף הפחתה במינון קוטל החרקים בתוך הכלוב, מכיוון שפחות טיפות אירוסול חודרות לרשת ונכנסות לכלוב. מחקרים עתידיים יוכלו להשתמש בבדים בעלי רשת גדולה יותר ובעיצובי כלובים עם קצב זרימת אוויר גבוה יותר של מאוורר (למשל, עיצובים גליליים) כדי לאמת עוד יותר את התוצאות שהתקבלו בשיטות הניסוי השונות.